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乙流来势汹汹，流感病毒核酸快速提取检测谨防假阴性

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近日，中国疾病预防控制中心-国家流感中心发布最新一期第52周（12月25日至12月31日）《流感监测周报》。

表1 全国流感病毒核酸检测情况

（数据来源：中国国家流感中心）

图1 南北方及全国乙型流感占比示意图

（数据来源：中国国家流感中心）

从监测数据可以看出，我国南方省份流感样病例流感病毒检测阳性率54.2%，北方省份流感样病例流感病毒检测阳性率36.2%，以A(H3N2) 亚型流感为主，B(Victoria)系占比持续升高。从全国南北方流感疫情来看，南方处于高位波动水平，北方已开始下降，再结合北京、天津等地流感监测数据可以初步得出结论：目前，全国本轮流感疫情已进入下降期，但乙型流感占比持续上升，需密切关注。

一、流感病毒简介

流行性感冒（简称流感）是流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。流感病毒根据其核蛋白 (NP) 和基质蛋白 (MP) 抗原性的不同，分为甲(A) 、乙(B) 、丙(C) 、丁(D) 四型。

图2：甲(A) 、乙(B) 、丙(C)流感病毒

乙型流感病毒（Influenza B virus），是由乙(B)型流感病毒引起的流行性感冒，其特点是起病急骤，畏寒、发热，体温在数小时至24小时内升达高峰，39-40℃甚至更高。乙型流感分为Victoria系和Yamagata系，主要感染人类，以局部流行为主。

二、乙流病毒结构

乙流病毒呈球形或丝状，球形直径80~120nm，丝状有时可达400nm左右。乙流病毒自外向内分为包膜、基质蛋白及核心三部分，核心包含遗传物质为单股、负链、分节段的RNA。

图3：乙流病毒结构

三、乙流病毒核酸检测

目前，感染性呼吸道疾病的诊断方法以病原体检查为主，主要检测方法有核酸检测、抗原检测、抗体检测、病毒的分离和培养。病原体分离培养培养周期长且敏感性较低，血清抗体检测因有窗口期不推荐使用。呼吸道病原体核酸检测采用特异性探针和特异性引物，结果准确，假阳性率低；磁珠法提取核酸，实时荧光定量PCR扩增指数倍放大，灵敏度高，感染早期即可检测到，可缩短检测窗口期。

核酸检测方法优势：

1. 精准度高：具有高精准度，可以更准确地检测出病毒。

2. 适用范围广：核酸检测方法适用于疑似病例的确诊，也可以用于病毒基因分型和变异研究。

3. 灵敏度高：随着技术的进步，核酸检测方法的灵敏度不断提高，能够更早地检测出病毒。

病毒核酸检测步骤：

通过检测病毒核酸，确定病毒的遗传信息。使用方法包括样本采集、加入试剂、观察结果等步骤。

1. 样本采集：采集含有病毒的样本，如口咽拭子等。确保采集样本时遵循适当的生物安全措施。

2. 样本处理：为了去除杂质和阻碍病毒核酸提取的物质，对样本进行处理。这可能包括离心、过滤或其他方法。

3. 细胞破碎：将样本中的细胞破碎以释放乙流病毒RNA。这可以通过化学方法、机械方法或超声波处理来实现。

4. 蛋白质消化：使用蛋白酶来降解样本中的蛋白质，以避免在后续步骤中干扰核酸提取。

5. 核酸提取：使用磁珠法核酸提取试剂盒或其他方法来纯化病毒核酸。这通常涉及将样本与试剂混合、离心和洗涤，以分离纯化的核酸。

6. 纯化的核酸：得到纯化后的病毒核酸溶液后，可以用于后续分析，如PCR检测、测序或其他研究技术。

通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)或reatimeRT-PCR即可直接检测患者上呼吸道分泌物中的病毒RNA。

四、核酸检测结果判读

如果检测结果为阳性，提示存在病毒的感染。如果检测结果为阴性提示未感染病毒。

凡知医学呼吸道病毒检测方案

病毒DNA/RNA总核酸提取试剂盒（磁珠法）

如何满足核酸检测特异性和灵敏度，提高检测成功率，关键前提是从样本中获取高浓度和纯度的核酸。病毒DNA/RNA总核酸提取试剂盒（磁珠法）可对呼吸道核酸检测样本(痰液、鼻咽拭子）中核酸实现高效提取，其中对于难处理的传统痰液样本，也具有以下技术优势，所获得核酸能更好应用于下游呼吸道病原体核酸检测。