细胞RNA提取『专属“搭子”』，助力实验批量无忧，效率飙升！

细胞RNA

 

细胞RNA作为生命活动的关键分子，在生物学研究中占据着举足轻重的地位。它不仅在基因表达调控中发挥着至关重要的作用，还是疾病诊断与预后评估的重要标志物，更是药物筛选与研发过程中的关键指标。因此，高效、大量、快速地提取细胞RNA成为了科研工作者们追求的目标。

 

PART 01

 

RNA的性质

 

RNA是核糖核酸的简称，与DNA不同，它通常是单链分子。这种单链结构使得RNA分子比DNA分子更易于降解。

图1 DNA和RNA的结构

 

RNA分子中的核糖基团比DNA分子中的脱氧核糖基团更容易发生水解反应，尤其是在碱性条件下。此外，RNA分子还容易受到RNA酶（RNase）的攻击，RNase广泛存在于细胞、组织和环境中，即使微量的RNase污染也可能导致RNA的快速降解。因此，在RNA提取过程中，必须采取措施避免RNA降解。

 

PART 02

 

RNA提取的基本原理

 

RNA提取的基本原理是利用RNA与DNA和蛋白质等其他细胞组分的物理化学性质差异，将其从细胞裂解液中分离出来。具体方法多种多样，但核心步骤都包括：

 

细胞裂解: 使用裂解液破坏细胞膜和细胞核，释放出细胞内的RNA。裂解液的成分通常包括去污剂以及离液盐，以破坏细胞膜；盐类，以调节离子强度；以及RNA酶抑制剂，以防止RNA降解。

 

RNA分离: 利用RNA与其他细胞组分的差异，例如大小、电荷或亲和力，将其从裂解液中分离出来。常用的方法包括：

 

 

有机溶剂提取法：

利用酚/氯仿等有机溶剂，将RNA从水相中分离出来。该方法较为经典，但操作较为繁琐，且存在有机溶剂残留的风险。

 

吸附柱法：

利用硅胶膜或其他吸附材料，选择性地吸附RNA，然后通过洗涤步骤将RNA纯化。这种方法提取率优于有机溶剂提取法，但需要反复离心，无法高通量操作，处理耗时较长。

 

磁珠法：

经表面修饰的磁珠在特定缓冲液条件下特异性吸附核酸，通过磁场分离和洗涤后，再洗脱得到纯核酸，易于自动化、高通量操作、安全无毒，结合提取仪能快速进行大量样本的核酸提取，广泛应用于分子生物学研究和临床诊断领域。

 

PART 03

 

提取细胞RNA：注意事项

 

 

 

一、RNA保护

 

RNA极不稳定，易受RNA酶降解。因此，在整个RNA提取过程中，最大限度地降低RNA酶活性至关重要。这需要从以下几个方面入手：

 

避免高温：

避免样品暴露于高温环境中，高温会加速RNA降解。例如，RNA溶解时，如果沉淀难以溶解，可以使用37℃水浴短暂处理，但时间不宜超过5分钟。

 

无RNA酶试剂和耗材：

使用无RNA酶的试剂、耗材和器械，例如无RNA酶的水、离心管、移液器枪头等。这些耗材的质量直接影响RNA提取的成功率和RNA的完整性。

 

 

 

二、防止RNA酶污染

 

RNA酶无处不在，极易污染样品，导致RNA降解。因此，防止RNA酶污染是RNA提取成功的关键：

 

 

保持工作台清洁：

在整个RNA提取过程中，保持工作台清洁，避免RNA酶污染。操作前，用75%乙醇擦拭工作台面，使用干净的、无RNA酶的实验用品。

 

佩戴手套和口罩：

操作过程中必须佩戴干净的手套和口罩，并经常更换。手和呼出的空气都是RNA酶的来源。

 

独立操作区: 

如果条件允许，最好在独立的无RNA酶污染的超净工作台中进行操作。

 

 

 

 

三、操作流程中注意事项

 

 

除了上述RNA保护和防止RNA酶污染的措施外，在具体操作流程中还需注意以下细节：

 

 

细胞计数准确：

准确计数细胞数量，确保后续RNA提取的效率。细胞数量过少，提取的RNA量不足；细胞数量过多，则会增加操作难度，并可能影响RNA的质量。

 

RNA干燥适度：

RNA干燥时间不宜过长，避免过度干燥导致RNA难以溶解。

 

RNA溶解充分：

确保RNA沉淀完全溶解，避免RNA损失。如果RNA沉淀难以溶解，可以短暂置于37℃水浴中，但时间不宜过长。

 

RNA浓度和纯度检测：

提取完成后，建议进行RNA浓度和纯度检测，评估RNA提取的质量，为后续实验提供可靠的依据。另外，通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整程度是非常重要的质量控制环节。

 

 

经验总结:

 

 

RNA研究的第一步为RNA提取，高质量的RNA是进行转录组测序、RT-PCR等试验的基础。细胞RNA提取是一个精细的操作过程，需要细致耐心和严格的操作规范，任何一个步骤的疏忽都可能导致RNA降解或污染，影响后续实验结果。

然而，由于RNA单链结构的不稳定性和无处不在的RNA酶，使得RNA在提取过程中容易发生降解。同时，传统方法面临多重障碍：操作步骤繁琐、耗时长，通常需要2-4小时才能完成；使用苯酚、氯仿等有毒有机试剂，危害实验人员健康；需要反复离心转移，增加样品损失和交叉污染风险；对操作技术要求高，稍有疏忽就会导致RNA降解。

 

因此，获得高质量的细胞RNA，选择合适、安全的提取产品非常重要！

 

磁珠法提取细胞RNA的优势：

 

• 自动化与高通量

• 操作简便快捷

• 安全环保

• 核酸纯度与回收率高

• 样本适应性强

• 结果稳定性好

 

凡知医学核酸提取产品种类丰富，为了满足客户高通量、快速的RNA提取需求，推出的磁珠法高通量细胞RNA提取试剂盒，可搭配自动化核酸提取仪，实现细胞RNA高效提取，助力生命科学研究。

 

凡知医学

 

高通量细胞RNA提取试剂盒（磁珠法）

 

 

产品介绍

 

 

本产品采用超顺磁性的磁性粒子纯化技术，适用于从多种新鲜或冻存的动物组织或培养细胞中高效率提取高纯度、高质量的总RNA。

适用于下游的多种分子生物学实验，包括RT-PCR、qPCR、高通量测序、分子克隆和RNase保护分析等。

• 简单快速：采用高性能纳米级超顺磁磁性微球，无需用到异丙醇或乙醇沉淀，提取过程简单，耗时短。

• 灵敏度高：可处理细胞数量级范围广（5×104-106）。

• 场景灵活：既可支持手动提取，又可适配高通量全自动化核酸提取仪，提升整体效率。

• 过程安全：提取过程不需要用到有毒的酚、氯仿、β-巯基乙醇等有机溶剂。

1.数据展示：使用本试剂盒对以下细胞株（表1）进行总RNA提取，提取效果从纯度、浓度、RQN值和琼脂糖凝胶电泳（图2）等方面进行分析：本产品提取纯度、浓度及条带完整度均较好，可用于建库和qRT-PCR 等下游应用。

表1 不同细胞株总RNA获得量平均值

图2 琼脂糖凝胶电泳 Jurkat细胞和 Hela细胞为70μL洗脱，上样量2μL；293F细胞为40μL洗脱，上样量5μL；M: DL5000 DNA marker

2.竞品对比：以下为凡知提取试剂盒与竞品的测试数据，结果显示：凡知产品浓度优于竞品，且完整性性更好。

表2 凡知与竞品浓度对比

图3 凝胶电泳图中，凡知与竞品对比

FireAuto96全自动核酸提取仪

 

 

 

 

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