如何高效提取血浆游离DNA？了解这些Tips回收率超95%！

血浆游离DNA

 

血浆游离DNA（cell-free DNA），又称循环 DNA 或无细胞DNA，是一种存在于血浆中的自由循环DNA分子，通常来自细胞的凋亡或坏死。

图1：血浆游离DNA

最早在1948年，Mandel首次在人类血液中检测到cfDNA的存在，当时并没有引起科学界的关注。直到1977年，Leon 报道了肿瘤患者外周血中存在较高水平的CfDNA，随后众多学者开始了肿瘤患者外周血中cfDNA的研究。1997年，香港的卢煜明教授运用PCR法在孕妇的血浆中扩增了Y染色体特异片段，证明怀有男胎的孕妇血浆中存在胎儿CfDNA，从而为无创产前筛查奠定了基础。

cfDNA大部分为双链DNA分子，片段长度主要集中在80bp~300bp，峰值位于166bp左右，且存在10.4bp的波动(对应核小体核心DNA螺距)。

基于以上特性，近年来，血浆游离DNA被广泛应用于无创产前基因诊断、癌症早期筛查和监测、微创手术导航、科学研究、预测治疗反应和预后评估等领域，并显示出广阔的应用前景。

图2：血浆游离DNA应用场景

1.样本收集：收集血浆样品，并将其储存在离心管中。

2.离心：将样品进行离心处理，通常在低速离心下离心10-15分钟。这个步骤旨在将红细胞和其他固体成分沉淀到管底，上层液体即为血浆。

3.转移血浆：使用吸管或移液器小心地将上层血浆转移到新的离心管中。避免吸取底部的沉淀物。

4.高速离心：将低速离心后的血浆在15000g离心5-10min，除尽残余的血细胞，防止基因组污染。

5.血浆预处理：先将转移的血浆样品在低温条件下保存，可以防止DNA降解。然后，将每个样品加入适量的蛋白酶K，用于消化蛋白质。反应时间根据厂家指示或实验室经验而定。

6.提取血浆中的DNA：使用商业化的DNA提取试剂盒，按照其说明书的步骤进行操作。一般步骤包括样品裂解、蛋白质沉淀、DNA结合、洗涤和最终的DNA溶解。这些步骤使用不同的缓冲液、酶和离心操作，以分离和纯化血浆中的DNA。

7.DNA质量评估：用Qubit仪测cfDNA的浓度、用毛细管电泳2100测峰图及基因组污染情况。

1.血浆中游离DNA含量较低：血浆中游离DNA的含量通常较少，约占总DNA的一小部分。因此，在提取过程中需要使用敏感的技术和方法来获取足够的DNA量。

2、纯度低：血浆中有丰富的蛋白、盐类等杂质，加上提取试剂中也有很多化学成分，导致提取的cfDNA纯度不高，又很大可能影响下游实验。

3、基因组污染：如果采血后不及时分离，血细胞可能破裂，导致基因组DNA污染cfDNA，影响下游cfDNA检测。

4、采血管中的保存液的干扰：随着专门用于cfDNA保存的采血管在临床上的大量使用，采血管中保存液成分也会干扰cfDNA的提取。

为了克服这些难点，研究人员通常会采用一系列的技术和方法来提高血浆游离DNA的提取效率和纯度。例如，使用较优的提取试剂盒和其他技术手段，来增加对血浆游离DNA的检测灵敏度和准确性。

 

血浆游离DNA提取试剂盒（磁珠法）

货号：FG1102

规格：48 rxns/96 rxns（2ml）

 

本产品采用自主研发的磁珠纯化技术和独特的缓冲液系统，针对血清、血浆样本中短片段游离DNA富集定向优化，旨在为用户提供安全、便捷，高灵敏、高质量的核酸提取方法。

 

产品优势

• 起始量灵活：支持从1mL到10 mL样本中提取cfDNA。
• 产物纯度高：脂类、盐类、糖类、蛋白质等杂质残留较少，样本完整。
• 过程安全：不涉及有毒的酚、氯仿、β-巯基乙醇等有机溶剂。
• 应用多元化：既可支持手动提取，又可高效地与液体工作站或全自动核酸提取仪配套使用，以进行快速、大样本量的提取，提升整体效率。

• 适用样本广：可适用于EDTA管收集的样本，也适用于各类cfDNA专用采血管收集的样本。

 

案例展示

利用本试剂盒从2 mL的血浆中提取游离DNA，结果显示提取后的DNA与投入DNA重合度高，基本无DNA片段大小偏好性，不同片段大小的DNA回收效率高。

图3：DNA片段偏好及回收效率结果展示