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干货分享 | NGS建库全攻略，助力建库实验成功率up up！

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基因测序技术

NGS（下一代测序技术）：又称高通量测序，以高输出量和高解析度为主要特色。与传统的Sanger测序技术相比，下一代测序技术具有更高的通量、更快的速度和更低的成本。能够一次性对数百万到数十亿个DNA片段进行测序，大大缩短了测序时间，提高了测序效率。

△主要步骤△

NGS技术因其高通量、低成本、高效率等特点目前已广泛地应用于遗传病检测、肿瘤早筛、伴随诊断、病原微生物检测等领域。在进行NGS建库时，选择合适的建库方法和试剂盒至关重要。以下是一些关键点和建议，帮助你建库实验的高效进行。

选择合适的建库方法

NGS建库是高通量测序技术的关键步骤，通过将DNA或RNA样本转化为适合测序仪读取的文库，为大规模、高通量的基因组测序和转录组测序提供了可能。常见的建库方法包括：

物理/酶切打断建库

通过物理或酶切打断基因组DNA，然后通过连接酶将接头连接到DNA片段上，最后通过PCR扩增。这种方法适用于全基因组检测。

转座酶建库

利用Tn5转座子将DNA片段化、末端修复、接头连接等多步反应转变为一步反应，大大缩短了建库时间。适用于珍贵的样本或低核酸含量的样本。

杂交捕获建库

针对目标区域设计特异探针，打断基因组DNA后与探针杂交，捕获目标区域。

PCR扩增子建库

利用PCR反应在待测DNA片段两端加上接头，适用于目标基因的捕获。

实验注意事项

在进行NGS建库实验时，需要注意以下几个关键点，以确保实验的成功和数据的可靠性：

样本质量与处理

样本质量：确保样本的质量和纯度。RNA样本应无降解，DNA样本应无明显污染。

样本处理：在处理样本时，避免RNase或DNase污染，确保样本的稳定性和完整性。

打断及末端修复

片段大小：根据测序平台的要求，将DNA或RNA打断为适合的片段大小。通常，DNA片段化后应进行末端修复，确保片段末端适合接头连接。

打断方法：选择合适的打断方法，如超声波打断、酶切打断或转座酶打断。转座酶法建库利用Tn5转座子将DNA片段化、末端修复、接头连接等多步反应转变为一步反应，大大缩短了建库时间。

接头连接与文库扩增

接头连接：确保接头连接的效率和准确性，避免非特异性连接。

文库扩增：通过PCR扩增文库时，注意控制PCR循环数，避免过度扩增引入偏差。

文库纯化与质量控制

纯化步骤：在文库构建过程中，进行多次纯化步骤，去除杂质和未结合的接头。

质量控制：使用Qubit定量、Agilent 2100 Bioanalyzer或Qsep等工具进行文库质量检测，确保文库的浓度、片段大小分布、纯度符合测序要求。

杂交捕获与洗脱

杂交条件：在杂交捕获过程中，严格控制杂交温度和时间，以减少非特异性结合。

洗杂步骤：洗杂步骤需要多次洗涤，逐步去除未结合的DNA和杂质，确保目标DNA的纯度。

试剂盒选择

选择合适的试剂盒：根据实验需求和样本类型，选择合适的NGS建库试剂盒，可适用于多种样本类型，并且具有高连接效率和良好的兼容性。

预混液与自动化：选择即用型预混液的试剂盒可以减少操作步骤，提高效率，同时适配自动化解决方案。

NGS建库实验中可能会遇到各种问题，但通过仔细检查实验步骤、优化操作条件和选择合适的试剂盒，可以有效解决这些问题。希望上述解决方案能帮助您顺利进行建库实验。

凡知医学推出多款NGS文库构建试剂盒，可以快速、高效构建NGS文库，兼容多种样本类型以及PCR-free工作流程，对低起始量的样本也具有很高的建库效率，保证测序工作的顺利和成功。下面为大家推荐几款高质量NGS建库试剂盒和浓度测定试剂盒，供您选择！

1.DNA建库试剂盒

DNA Library Preparation Kit

货号：FG4103

规格：24测试/盒

产品介绍：本产品和一般建库方法相比，操作简单、方便，极大地缩短了文库构建时间。另外，本试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效制备用于Illumina二代测序平台的DNA文库。

产品应用：全基因组测序；全外显子或靶向捕获测序；扩增子测序；免疫共沉淀测序；宏基因组测序，适用于Novaseq/Hiseq x-ten/Hiseq 4000/Miseq等Illumina测序平台。

产品优势：

● 满足低起始量：适用于100pg-1μg起始的DNA。

● 支持多种样本类型：常规动植物基因组、微生物基因组、FFPE、cfDNA、ChIP DNA 等样本。

2.mRNA建库试剂盒

mRNA Library Preparation Kit

货号：FG4102

规格：24测试/盒

产品介绍：本产品是针对高通量测序平台专门研发的用mRNA转录组文库构建试剂盒。利用磁珠分选的方式，可快速获得特定长度的文库，满足不同实验的个性化需求，用于Illumina平台的测序。

产品应用：基因表达分析；单核苷酸变异分析；剪切变异体分析；基因融合鉴定。

产品优势：

● 满足低起始量：适用于10ng-1μg的产物。

● 支持多种样本类型：包括动植物和真菌等真核生物的Total RNA。

3.FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒

FireQubit dsDNA HS Assay Kit

货号：FG4101

规格：500 rxns

产品介绍：FireQubit dsDNA HS Assay Kit是一种简便快速、灵敏、准确度高的双链DNA(dsDNA) 荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、标准品和缓冲液，对dsDNA有高度选择性，RNA干扰小，对于dsDNA样本在0.1-100ng之间有良好的线性关系，相比于传统的紫外检测(A260)方法，可更精确的对DNA进行定量，免除其它物质的干扰，可准确测定dsDNA浓度，提高实验的准确性。

本试剂盒操作简单，可使用荧光酶标仪或Qubit®仪器进行检测。针对酶标仪高通量检测模式，特别包含了5个点的标准品，能使定量结果更加准确。

产品应用：可以对浓度为100pg/µL-100ng/µL的dsDNA样品进行精确定量。

产品优势：

● 灵敏度高；● 特异性强；● 耐受性好；● 线性范围宽；● 操作简便，兼容性。